ल्यूमिनसेंस के लिए उपयोग किया जाने वाला केमिलुमिनसेंट एजेंट बहुत अलग है!
October 23 , 2024
इन विट्रो डायग्नोस्टिक्स के क्षेत्र में केमिलुमिनेसेंस इम्यूनोएसे तकनीक लंबे समय से प्रसिद्ध है! इनमें शामिल हैं, प्रत्यक्ष केमिलुमिनेसेंस, इलेक्ट्रोकेमिलिनेसेंस, एंजाइमैटिक केमिलुमिनेसेंस, अप्रत्यक्ष केमिल्यूमिनसेंस। बहुत सारे प्रकार के ल्यूमिनेसेंस में ल्यूमिनसेंट एजेंटों का उपयोग किया जाता है जो बहुत भिन्न भी होते हैं! 1. एक्रिडीन एस्टर
प्रत्यक्ष रसायनयुक्त रसायन
एक्रिडीन एस्टर (एई) एक ट्राइसाइक्लिक कार्बनिक यौगिक है जो ऑक्सीकरण के लिए अतिसंवेदनशील है। जब क्षारीय परिस्थितियों में H2O2 द्वारा ऑक्सीकरण किया जाता है, तो यह 470nm की तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश उत्सर्जित करता है और इसमें उच्च चमकदार दक्षता होती है। इसका उत्तेजित उत्पाद एन-मिथाइलएक्रिडोन ल्यूमिनसेंस प्रतिक्रिया प्रणाली का ल्यूमिनाइट है। इसका उपयोग हैप्टेन और प्रोटीन या पॉलीक्लोनल या मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के लेबलिंग के लिए किया जाता है।
यह एक सिंथेटिक पदार्थ है, जो प्रकृति में मौजूद नहीं है, इसलिए इसमें कोई पृष्ठभूमि शोर हस्तक्षेप नहीं है; एक्रिडीन एस्टर पीएच और तापमान में परिवर्तन के प्रति अपेक्षाकृत असंवेदनशील है। साथ ही, इसका आणविक भार केवल 481 है, स्थानिक बाधा प्रभाव छोटा है, और ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया को उत्प्रेरक की आवश्यकता नहीं होती है, जब तक कि इसे क्षारीय वातावरण में किया जा सकता है।
ल्युमिनेसेंस तेजी से प्रतिक्रिया करता है और इसकी पृष्ठभूमि कम होती है। ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया के दौरान, संयुग्म विघटित हो जाता है, इसलिए मुक्त एक्रिडीन एस्टर की चमक बाधित नहीं होती है, और अभिकर्मक में अच्छी स्थिरता होती है। यह उद्योग में ल्यूमिनसेंट एजेंट का एक उत्कृष्ट विकल्प है।
टेराप्रिडाइन रूथेनियम [आरयू(बीपीआई)3]2+ एक इलेक्ट्रोकेमिलिमिनसेंट एजेंट है जो एनोड की सतह पर इलेक्ट्रॉन दाता ट्राइप्रोपाइलामाइन (टीपीए) के साथ ऑक्सीकरण करता है। एंटीजन या एंटीबॉडी की प्रत्यक्ष लेबलिंग।
ल्युमिनेसेंस की विशेषता केवल 0.01 एमएस का एक स्थिर प्रकाश उत्सर्जन है, जो 300 एमएस पर चरम तक पहुंचता है, और प्रति सेकंड सैकड़ों हजारों चक्रों का इलेक्ट्रोकैमिल्यूमिनेसेंस चक्र विश्लेषण की संवेदनशीलता में काफी सुधार करता है।
अंकन स्थिर है और नियंत्रित करना आसान है, लेकिन विद्युत क्षेत्र को एक विशेष मापने वाले सेल की आवश्यकता होती है, और इलेक्ट्रोड को स्थिति में बहाल करने के लिए प्रत्येक माप के बाद मापने वाले सेल को साफ करने में 40-60 सेकंड लगते हैं, जो आसान है क्रॉस-संदूषण, परिणामों की सटीकता को प्रभावित करता है, और विश्लेषण की गति को कम करता है।
3.ल्यूमिनोल और इसके डेरिवेटिव
एंजाइमी केमिलुमिनसेंस
ल्यूमिनोल (3-एमिनोबेंज़ॉयलहाइड्राजाइड), आइसोलुमिनोल (4-एमिनोबेंज़ॉयलहाइड्राजाइड) और उनके डेरिवेटिव में केमिलुमिनसेंट गुण होते हैं।
तटस्थ समाधान में: आमतौर पर द्विध्रुव आयनों (ज़्विटरियन्स) के रूप में मौजूद होता है।
क्षारीय घोल में: यह एक द्विसंयोजक आयन बन जाता है, जिसे ऑक्सीजन अणुओं द्वारा एक मध्यवर्ती में ऑक्सीकरण किया जा सकता है जो केमिलुमिनसेंस घटना उत्पन्न कर सकता है।
ऑक्सीडेंट में: ल्यूमिनोल एक उत्तेजित अवस्था में परिवर्तित हो जाता है, जो जमीनी अवस्था और प्रतिदीप्ति में विघटित हो जाता है।
4. एडामेंटेन एएमपीपीडी
एंजाइमी केमिलुमिनसेंस
सामान्य तौर पर, एडामेंटेन संरचना बहुत स्थिर होती है, लेकिन जब क्षारीय फॉस्फेट का सामना होता है, तो क्षारीय फॉस्फेट एक अस्थिर मध्यवर्ती बनाने के लिए फॉस्फेट समूह को हटाने के लिए एडामेंटेन को उत्प्रेरित करेगा, जो स्वचालित रूप से विघटित हो जाएगा और 470 एनएम प्रकाश संकेत उत्पन्न करेगा, जो लंबे समय तक चल सकता है दसियों मिनट से लेकर कई घंटे तक।
5. फोटोप्रेरित रसायनयुक्त रसायन
विशेषता
कम प्रतिक्रिया समय: एक सजातीय प्रतिक्रिया पैटर्न।
उच्च संवेदनशीलता: प्रतिक्रिया प्रक्रिया को चरण दर चरण बढ़ाया जाता है, और ल्यूमिनसेंस तेजी से संवेदनशीलता में सुधार करता है।
अच्छी स्थिरता: संपूर्ण ऊर्जा (प्रकाश) उत्पादन, स्थानांतरण और प्रवर्धन प्रक्रिया बहुत स्थिर है, और यह पीएच, आयनिक शक्ति और तापमान से आसानी से प्रभावित नहीं होती है।